对DNA分子做酶切时的注意事项

对DNA分子做酶切时的注意事项 | 时间: May-21 15:27:26 | 分类:技术栏目

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    如果是要做酶切,提质粒的最后一步最好是用水溶解DNA,因为TE里面的离子会影响酶切的效率。

  双酶切制备克隆插入片段的载体,最好选择带有外源片段的质粒,是否酶切完全,从电泳条带的分子量上可以比较明确地判断。空质粒单切完全和双切完全在分子量上差异不大。
  在做酶切时,也可以象PCR一样配置主反应液,每次反应前先列好反应的体系,算好需要的反应数,然后按所需反应的体系按所需反应数放大,加入buffer、酶、水,质粒栏空缺,然后混合后按除质粒DNA的体积分装,然后再在每管中加入相应体积的质粒DNA酶切,这样做的好处如下,特别是当同时有10几个阳性克隆需要鉴定时尤为明显:
  (1)各反应成分均一;
  (2)可大大减少限制型内切酶的使用;
  (3)节省时间。
 

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